大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒的標準曲線:
1 錯誤的方法重懸標準品 加入正確量的溶液重懸標準品,重懸充分
2 標準品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標準品
3 標準品污染 使用一次性的滅菌吸頭, 標準品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標準品
5 波長選擇錯誤TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而 前者比色波長為450nm,后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。
6 標準品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高,標準品失活 盡量縮短運輸時間,夏季應(yīng)放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nmTMB顯色需終止后檢測,否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。
結(jié)果判斷與分析:
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應(yīng)的指標標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
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