產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒是簡便的利用CTAB取大腸桿菌基因組DNA的試劑盒,其提取原理是利用蛋白酶K消化蛋白,CTAB沉淀多糖,再經(jīng)加熱使蛋白變性與DNA分離,乙醇沉淀核酸獲得基因組DNA,可進行酶切、PCR等下游實驗。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒的操作說明:
1、本品包含一份甘油菌,使用本甘油菌時可以不用*融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以*融解后使用,但隨著凍融次數(shù)的增加,細菌的活力會逐漸下降。
2、為保證菌種純正,避免其它細菌污染,盡量先劃平板,然后再挑單克隆菌落進行后續(xù)操作。
冷凍管開封:
用浸過75%酒精的脫脂棉嚴格消毒冷凍管蓋。
菌株復溶:
無菌環(huán)境中旋開裝有復溶液的滴瓶蓋,吸取1ml左右復溶液,加入到冷凍管中。輕輕振蕩,使凍干菌株溶解呈懸浮狀。
菌株復壯:
用無菌吸管吸取菌懸液,轉(zhuǎn)移到復溶液滴瓶中。做好標識,在適宜溫度下培養(yǎng)。細菌在30-‐35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-‐48h,真菌在23-‐28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-‐72h(必要時,可適當延長培養(yǎng)時間)。
菌株傳代:
將得到的菌株的新鮮培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到適宜的固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基中(盡量增大接種量:如用無菌吸管吸取≥50μl新鮮培養(yǎng)物至固體培養(yǎng)基,邊移動邊緩慢釋放),適宜溫度下培養(yǎng),用以菌株的保藏、傳代及制備工作菌株。