維生素B6檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理:
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
維生素B6檢測(cè)試劑盒的組成:
(1)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
?。?)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為吐溫20磷酸緩沖鹽水;
?。?)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
?。?)酶的底物;
?。?)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);
(6)已包被抗原或抗體的固相載體。
維生素B6檢測(cè)試劑盒的操作要點(diǎn):
1)標(biāo)本的采取和保存:可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛,體液、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定,有些則需經(jīng)預(yù)處理。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本;
2)試劑的準(zhǔn)備:所需試劑、蒸餾水、去離子水、自配的緩沖液;
3)加樣:一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。
4)保溫:ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育。
5)洗滌:洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種。
6)顯色和比色:顯色是ELISA中的一步溫育反應(yīng),此時(shí)酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。儀器準(zhǔn)備為酶標(biāo)儀。
7)結(jié)果判斷:分定性判定和定量判定。