型 號(hào)
產(chǎn)品時(shí)間2023-11-05
所屬分類果膠系列
報(bào)價(jià)300
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
果膠甲酯化程度生化檢測(cè)試劑盒 | 100管/96樣 50管/48樣 | EY-01S1399 |
商品詳情:
測(cè)定意義
植物細(xì)胞壁中的果膠是植物初生細(xì)胞壁的主要成分,除了起結(jié)構(gòu)支撐、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)茸饔猛?,還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細(xì)胞壁的堅(jiān)韌程度及其抗性。
測(cè)定原理
果膠甲酯鍵經(jīng)皂化處理后釋放出甲醇,甲醇與2,4-戊二酮反應(yīng)顯色,在412nm下測(cè)定吸光值;同時(shí)半乳糖醛酸在70℃下與濃硫酸反應(yīng)生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸,5-甲酰基-2-呋喃甲酸與3,5-二甲基反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì),在450nm下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測(cè)定管=A1-A2。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
3、操作表:
試劑名稱(μL) | 測(cè)定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH活力單位的計(jì)算:
1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。
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