注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:人免疫缺陷病毒型群型PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Human Immunodeficiency Virus 1(HIV1MA)1MARTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
人免疫缺陷病毒型群型PCR檢測(cè)試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
去芹菜糖桔梗皂苷D中文別名: 去芹糖桔梗皂苷D 英文名: Deapio platycodin D CAS登錄號(hào): 新品待定分子量: 1092.32 分子結(jié)構(gòu):
遠(yuǎn)志山酮III中文別名: 遠(yuǎn)志口山酮 英文名: Polygalaxanthone III 英文別名: 2-(6-O-D-Apio-beta-D-furanosyl-beta-D-glucopyranosyl)-1,3,6-trihydroxy-7-methoxy-9H-xanthen-9-one CAS登錄號(hào): 162857-78-5 分子式: C25H28O15
丹酚酸D中文別名: 丹參酚酸D 英文名: Salvianolic acid D 英文別名: (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(Carboxymethyl)-3,4-dihydroxyphenyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid CAS登錄號(hào): 142998-47-8 分子式: C20H18O10
丹酚酸C中文別名: 丹參酚酸C 英文名: Salvianolic acid C 英文別名: (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-4-benzofuranyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid CAS登錄號(hào): 115841-09-3 分子式: C26H20O10
三七皂苷R2(R型)英文名: R-Notoginsenoside R2 CAS登錄號(hào): 新品待定 分子式: C41H69O13 分子量: 871.01 分子結(jié)構(gòu):
三七皂苷Ft1英文名: Notoginsenoside Ft1 CAS登錄號(hào): 新品待定 分子式: C47H80O17 分子量: 917.13 分子結(jié)構(gòu):
苯甲酰次烏頭原堿英文名: Benzoylhypacoitine 英文別名: Benzoylhypaconine CAS登錄號(hào): 63238-66-4 分子式: C31H43NO9 分子量: 573.29
次烏頭原堿英文名: Hypaconine CAS登錄號(hào): 新品待定分子式: C24H39NO8 分子量: 469.57 分子結(jié)構(gòu):
新烏頭原堿英文名: mesaconine CAS登錄號(hào): 6792-09-2 分子式: C24H39NO9 分子量: 485.57 分子結(jié)構(gòu):
28-去甲基-β-香樹脂酮英文名: 28-demethyl -β-amyrone CAS登錄號(hào): 新品待定分子式: C29H46O 分子量: 410.67 分子結(jié)構(gòu):
長(zhǎng)春瑞濱中文別名: 去甲長(zhǎng)春花堿,去甲脫水長(zhǎng)春堿,諾維本,民諾賓 英文名: Vinorelbine 英文別名: 5-Noranhydrovinblastine; NVB;Kw-2307;(2β,3β,4β,5α,12R,19α)-4-(Acetyloxy)-6,7-didehydro-15-[(2R,6R,8S)-4-ethyl-1,3,6,7,8,9-hexahydro-8-(methoxycarbonyl)-2,6-methano-2H-azecino[4,3-b]indol-8-yl]-3-hydroxy-16-methoxy-1-methyl-aspidospermidine-3-carboxylic acid, methyl ester CAS登錄號(hào): 71486-22-1 分子式: C45H54N4O8
人免疫缺陷病毒型群型PCR檢測(cè)試劑盒L-丙氨酰胺鹽酸鹽,25g4-Propylcyclohexanone 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
L-丙氨酰胺鹽酸鹽,500gDiethyl isopropylmalonate 質(zhì)量規(guī)格:>800 µg/mg,USP
L-丙氨酰胺鹽酸鹽,5g(S)-(-)-2-Methyl-1-butanol 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
D-天冬酰胺一物,100g5,6,7,8-Tetrahydroquinaldine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
D-天冬酰胺一物,25gailanthone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
D-天冬酰胺一物,500gPyridinium chlorochromate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
D-天冬酰胺一物,5gBOC-L-Asparagine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
D-谷氨酰胺,1gChlorodifluoroacetic acid ethyl ester 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
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