注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:擠奶工結(jié)節(jié)病毒PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣
英文名稱:Milker's Nodule Virus(MNV)PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
擠奶工結(jié)節(jié)病毒PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
3-羥基苯/間甲醛苯酚/2-羥基-4-甲硫基丁酸/蛋氨酸羥基類似物/3-HydroxybenzaldehydeBR,97%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,100-83-4RT,避光
4-羥基苯苯酚/對(duì)苯酚甲酸/對(duì)羥基安息香酸/尼泊金酸/甲醛基苯酚/對(duì)羥基苯醛/對(duì)苯酚甲醛/PHBACP100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,123-08-0RT
2-硝醛/2-NitrobenzaldehydeAR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌, 552-89-6RT
3-硝基NitrobenzaldehydeCP,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,99-61-6RT
4-硝基苯-NitrobenzaldehydeAR,99%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,555-16-8RT
鄰苯二甲醛/鄰苯二醛/酞醛/1,2-苯二甲醛/1,2-苯二醛/鄰酞醛醛鄰羧酸/苯醛酸/OPACP10克國(guó)產(chǎn)643-79-82~8℃,避光
對(duì)苯二甲醛/對(duì)酞醛/1,4-苯二甲醛/p-PhthalaldehydeCP10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,623-27-8RT,避光
丙酮醛/甲基乙二醛/2-氧代丙醛/酮丙醛/焦性葡萄醛/2-氧丙醛/2-側(cè)氧丙醛/MethylglyoxalBR,32%250毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,78-98-8RT
十一醛/正十一醛/十一碳醛/UndecanalBR,97%25毫升,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,112-44-7RT
藜蘆醛/焦兒茶醛二甲醚/綠藜蘆醛/香草醛甲醚/香蘭素甲醚/甲基香蘭素/3,4-二甲氧基醛3,4-DimethoxybenzaldehydeAR,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,120-14-9RT
香蘭素/香草醛/香莢蘭醛/凡尼林/香莢蘭素/3-甲氧基-4/4-羥基-3-甲氧基醛/VanillinAR,99.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,121-33-5RT,避光
鉬酸鈉/二水合鉬酸鈉/Sodium molybdate dihydrateAR,99%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10102-40-6RT
酚酞二磷酸四鈉鹽/Phenolphthalein bisphosphate tetrasodium saltBR,95%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,68807-90-9保存:-20℃
無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽/無(wú)水磷酸肌酸鈉鹽/肌酸磷酸鈉鹽/磷酸肌肉素二鈉/Creatine phosphate sodium salt高純,97%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,922-32-72~8℃
擠奶工結(jié)節(jié)病毒PCR檢測(cè)試劑盒在哪里有賣2,2-BIS[4-(2-HYDROXY-3-METHACRYLOXYPROPOXY)PHENYL]PROPANE 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,BR
Dimethylbisdiphenylphosphinoxanthene 質(zhì)量規(guī)格:滴定法≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
Semixylenol orange 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Chromic nitrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Piperazine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulphonic acid) disodium salt 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
D(-)-Asparagine monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
4-Methylphenethylamine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
GLYCOCHENODEOXYCHOLIC ACID SODIUM SALT 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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