注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:綿羊星狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Ovine Astrovirus (OAstV)RTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
綿羊星狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
鹽胍其他名稱: 鹽亞氨脲;胍鹽鹽;氨基甲脒鹽鹽;胍單鹽鹽英文名稱: Guanidine hydrochloride其他名稱: Aminomethanamidine hydrochloride;Carbamamidine hydrochloride;Carbamidine hydrochloride;Aminoformamidine hydrochloride;Iminourea hydrochloride產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%包裝:100克/500克CAS號(hào):50-01-1
異硫氰胍1公斤,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,中文名稱: 異硫氰胍其他名稱: 硫氰胍;胍硫氰鹽;硫氰亞脲英文名稱: Guandine thiocyanate其他名稱: Guanidinium rhodanide;Guanidinium thiocyanate產(chǎn)品規(guī)格: BR,99%
硫氨基胍英文名稱: Aminoguanidine hemisulfate salt其他名稱: Guanylhydrazine hemisulfate salt產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%包裝:25克CAS號(hào):996-19-0
二胍英文名稱: DPG其他名稱: Diphenyl guanidine;1,3-Diphenylguanidine;N,N'-Diphenylguanidine;sym-Diphenylguanidine;Melaniline產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%包裝:100克CAS號(hào):102-06-7C13H13N3=211.26
碳胍英文名稱: Guanidine carbonate其他名稱: Guanidine carbonate salt產(chǎn)品規(guī)格: AR,99.5%包裝:100克/200克/1公斤CAS號(hào):593-85-1C3H12N6O3=180.17
乙酰丁香中文名稱: 乙酰丁香其他名稱: 4'-羥基-3',5'-二甲氧基乙;3',5'-二甲氧基-4'-羥基乙;二甲氧基對(duì)羥基乙;乙酰丁香酚;3',5'-二甲氧基-對(duì)羥基乙英文名稱: Acetosyringone其他名稱: 3',5'-Dimethoxy-4'-hydroxyacetophenone ;4'-Hydroxy-3',5'-dimethoxyacetophenone產(chǎn)品規(guī)格: BR,97%包裝:1克/5克/25克
酚試劑中文名稱: 酚試劑其他名稱: 3-甲基-2-并噻唑腙鹽鹽;MBTH鹽鹽;Sawicki's 試劑英文名稱: MBTH Hydrochloride其他名稱: 3-Methyl-2-benzothialinone;3-Methyl-2-benzothiazolinonehydrazone Hydrochloride;Monohydrate; Sawicki's Reagent;Besthorn's hydrazone ;2-Hydrazono-3-methylbenzothiazoline hydrochloride產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%包裝:1克/5克/25克/100克
交鏈聚乙烯吡咯中文名稱: 交鏈聚乙烯吡咯其他名稱: 聚乙烯聚吡咯;交聯(lián)聚乙烯基吡咯;交聯(lián)聚合物;聚[1-(2-氧代-1-吡咯基)-1,2-乙二基];交聯(lián)PVP聚乙烯吡咯;交聯(lián)聚維英文名稱: PVPP其他名稱: Polyvinylpyrrolidone;Poly(vinylpolypyrrolidone)產(chǎn)品規(guī)格: USP級(jí)包裝:100克/500克/1公斤
綿羊星狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格2-(Phenylthio)aniline 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
Zinc citrate dihydrate 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
1-Bromo-2-(1-methylethyl)benzene 質(zhì)量規(guī)格:>98%,MEK1/2抑制劑
HESPERETIN 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
LINOLENIC ACID ETHYL ESTER 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
Chloroacetonitrile 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
CADMIUM TELLURIDE 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
Dichloroacetonitrile 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
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