注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):無(wú)綠藻通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱(chēng):Prototheca spp.PCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
無(wú)綠藻通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
1,3-二羥基萘其他名稱(chēng): 1,3-萘二酚;萘間二酚;間萘二酚;間二萘酚英文名稱(chēng): 1,3-Dihydroxynaphthalene其他名稱(chēng): 1,3-Naphthalenediol;Naphthoresorcinol產(chǎn)品規(guī)格: BR,99%包 裝: 1克/5克CAS號(hào):132-86-5
六異丙醇500克國(guó)產(chǎn)中文名稱(chēng): 六異丙醇其他名稱(chēng): 1,1,1,3,3,3-六-2-丙醇;1,1,1,3,3,3-六代-2-丙醇;1,1,1,3,3,3-六異丙醇英文名稱(chēng): HFIP其他名稱(chēng): HFP;1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol;Hexafluoroisopropanol產(chǎn)品規(guī)格: BR,99.5%
1-溴癸英文名稱(chēng): 1-Bromodecane其他名稱(chēng): Decyl bromide產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%包 裝: 100毫升/500毫升CAS號(hào):112-29-8C10H21Br=221.18
6-溴乙其他名稱(chēng): 6-溴己;6-溴代己;6-溴己烯;6-溴已;6-溴正己英文名稱(chēng): 6-Bromohexanoic acid其他名稱(chēng): 6-Bromocaproic acid產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%包 裝: 5克/25克/100克/500克CAS號(hào):4224-70-8
四丙基溴化銨中文名稱(chēng): 四丙基溴化銨其他名稱(chēng): 四丙溴化銨;溴化四丙銨;四正丙基溴化銨;溴化四丙基銨英文名稱(chēng): Tetrapropylammonium bromide產(chǎn)品規(guī)格: AR,98%包 裝: 25克/100克/500克CAS號(hào):1941-30-6
吩嗪乙基硫鹽其他名稱(chēng): 吩嗪硫乙酯英文名稱(chēng): Phenazine ethosulfate其他名稱(chēng): N-Ethyldibenzopyrazine ethyl sulfate salt產(chǎn)品規(guī)格: BR,95%包 裝: 1克/5克CAS號(hào):10510-77-7
5-氨基頡草其他名稱(chēng): 5-氨基戊;5-氨基正戊;戊氨;5-氨戊英文名稱(chēng): 5-Aminovaleric acid其他名稱(chēng): 5-Aminopentanoic acid;Homopiperidinic acid產(chǎn)品規(guī)格: BR,97%包 裝: 5克/25克CAS號(hào):660-88-8
3-羥基丁其他名稱(chēng): DL-3-羥基-n-?。籇L-3-羥基丁英文名稱(chēng): 3-Hydroxybutyric acid其他名稱(chēng): DL-3-Hydroxybutyric Acid產(chǎn)品規(guī)格: BR,75%包 裝: 5克/25克CAS號(hào):625-71-8
無(wú)綠藻通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格5-Chlorothiophene-2-sulfonyl chloride 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(T)
NA 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
2,3,4-Trimethoxybenzoic acid 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
Hexachloroacetone 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-Butylbenzoic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-Fluoroindole 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
4-Hydroxyresveratrol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
1,1,3-Trichloroacetone 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
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