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檸檬酸合酶(CS)生化檢測試劑盒

型 號

產(chǎn)品時間2023-11-07

所屬分類輔酶Ⅰ系列

報(bào)價(jià)300

產(chǎn)品描述:檸檬酸合酶(CS)生化檢測試劑盒CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

產(chǎn)品概述

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產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

檸檬酸合酶(CS)生化檢測試劑盒

100/48 50/24 25/12

EY-01S18

 

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測定意義:                         

CSEC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水





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試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。


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1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。


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(1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應(yīng)時間,1min。


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