傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

6-10B人鼻咽癌細(xì)胞系

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀(guān)察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

WISH(人羊膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 豚鼠白介素1α(IL1α)ELISA試劑盒 IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

FOXD2： 叉頭蛋白D2抗體 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HVVEC)( 5×105 )

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LoVo 豚鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

FOXE3： 叉頭蛋白E3抗體 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細(xì)胞;15P-1 小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

CN5 Others Mouse 小鼠 Coactin 5 / CN5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 豚鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒 IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

phospho-MCK10 (Tyr513)： 0酸化神經(jīng)上皮酪酸激酶/癌激酶10抗體 盤(pán)羊皮膚細(xì)胞;ASHS3

IFNA5 Protein Human 重組人 IFNA5 / IFNaG / Ierferon alpha-G 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠血管動(dòng)蛋白(AMOT)ELISA試劑盒 HDL ISA Kit 大鼠高密度脂蛋白 96T

MMS21： E3連接酶MMS21蛋白抗體 AK2 Others Human 人 AK2 / Adenylate kinase 2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠嗅鞘細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠血沉(ESR)ELISA試劑盒 Plant Vitamin B12,VB12  植物12 96T

MID2/RNF60/Midline-2： 環(huán)指蛋白60抗體 LS 174T細(xì)胞，結(jié)腸腺癌細(xì)胞 鼠黑色素瘤細(xì)胞系,B16-F1細(xì)胞 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;M619

6-10B人鼻咽癌細(xì)胞系HEG1： HEG同源蛋白1抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9403

LLC-MK2(恒河猴腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人甘露糖受體(MR)ELISA 試劑盒 E2F2 轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗原 0.5mg

HELZ： 人抑制蛋白抗體 EndoFectagen? 內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒

CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA 試劑盒 E2F4 轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗原 0.5mg

HEMK1： Hemk甲基轉(zhuǎn)移酶家族1號(hào)蛋白抗體 FCGR3B Others Human 人 CD16b / FCGR3B CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)