注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):馬鼻疽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱(chēng):Malleomyces malleiPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
馬鼻疽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
2′-脫氧尿苷/2′-脫氧尿甙/2′-脫氧尿嘧啶核苷/2ˊ-去氧尿苷/尿嘧啶脫氧核苷/去氧尿啶/2′-Du超純,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,951-78-0RT
A250/A260=0.70~0.74
5-溴-2-脫氧尿苷/溴脲苷/5'-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷/5-溴去氧脲苷/溴尿苷/溴脲嘧啶苷/5-溴-2ˊ-脫氧尿核苷/5-溴尿嘧啶-2ˊ-脫氧核苷/5-溴脫氧尿苷/5-BrdU/BudR/BDUACS級(jí),99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,59-14-32~8℃
5-溴尿苷/5-溴尿嘧啶核苷/5-BrUACS級(jí),99%250毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,957-75-52~8℃
5-溴-2-脫氧胞苷/5-溴脫氧胞嘧啶核苷/5-溴脫氧胞苷/5-BrdC高純,98%250毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1022-79-32~8℃
5-碘-2-脫氧胞苷/碘脫氧胞苷/伊巴他濱/5-碘-2'-脫氧胞嘧啶核苷/5-IDC超純,99%250毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,611-53-0保存:-20℃
2,2′-脫水尿苷/2,2-環(huán)尿苷/2,2'-脫水尿甙/2,2′-O-Cyclouridine高純,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,3736-77-4RT
2′-溴脫氧尿苷/2'-溴-2'-脫氧尿苷/2′-BrdU高純,98%100毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,72218-68-92~8℃
2′-疊氮脫氧尿苷/2'-疊氮-2'-脫氧尿苷/2′-Azido-2′-deoxyuridine高純,98%5毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,26929-65-72~8℃
2′-氟脫氧尿苷/2'-脫氧-2'-氟尿苷/2'-氟-2'-脫氧尿苷/DMT保護(hù)性-2‘-氟脫氧尿苷/2-FDU高純,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,784-71-42~8℃
2′-氟脫氧胞苷/2'-脫氧-2-氟胞苷/2-FDC高純,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10212-20-12~8℃
A250/A260=0.82±0.03
阿糖胞苷/胞嘧啶-β-D-呋喃阿拉伯糖苷/1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-4-氨基-2(1H)-嘧啶酮/阿拉伯糖胞嘧啶/胞嘧啶阿拉伯糖苷/阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶/阿拉伯糖基胞嘧啶/Ara-C超純,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,147-94-42~8℃
鹽酸環(huán)胞苷/鹽酸環(huán)胞啶/鹽酸環(huán)胞甙/安西他濱鹽酸鹽/Cyclo-C高純,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,10212-25-6RT
馬鼻疽桿菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格Sodium percarbonate 質(zhì)量規(guī)格:>99%
4-Benzoylpyridine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Alachlor 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Estradiol benzoate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
5-Cyanoindole 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
2,2,4,4,6,6-Hexamethyl-S-trithiane 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Triazol-3-amine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Aluminon 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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